При выявлении нормальных естественных антител,
проводят исследование на выявление полных иммунных антител у беременной.
Методика определения иммунных полных антител:
Для удобства сортируем кровь в три ряда, согласно
группам крови отца: А, В, АВ. Там, где группа крови отца неизвестна или
неуказано относим к четвёртой группе (АВ).
Напротив каждой пробирки с кровью беременной подставляем
сухую чистую стеклянную пробирку (центрифужную).
Маркируем пробирки согласно групп крови отцов (например А1,А2, В1,В2, АВ1, АВ2 и так далее). В неё наливаем 1 мл сыворотки и 3 мл физ.раствора.
Инкубируем сыворотку при температуре 70 градусов в течение 10 минут.
Маркируем пробирки согласно групп крови отцов (например А1,А2, В1,В2, АВ1, АВ2 и так далее). В неё наливаем 1 мл сыворотки и 3 мл физ.раствора.
Инкубируем сыворотку при температуре 70 градусов в течение 10 минут.
Берём пластины на 72 лунки для серологических
реакций. Подписываем их. Пластина А (где будем ставить реакции с кровью
беременных женщин, чьи мужья имеют вторую А группу крови). И подписываем по
правому краю А1, А2, А3 и так далее. Пластина В – когда у мужей третья В группа
крови (В1, В2, В3 и так далее). Для четвёртых АВ групп крови и неизвестных
планшет можно подписать так АВ А (затем 1,2,3…) и АВВ (1,2,3….).
Во все лунки подписанных пластин, кроме первых,
наливаем по 100 мл физ.раствора. Затем из стеклянных пробирок в первую (пустую)
и вторую лунки пластины наливаем по 100 мкл разбавленной подогретой сывортотки беременных.
В планшет А – сыворотку беременной, у мужа которой А-группа крови. В планшет В –
сыворотку мужа с В-группой.
Из вторых лунок набираем по 100 мкл и титруем до конца
планшета по 100 мкл. Титр получаем следующий: 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64,
1:128, 1:256 и так далее.
Отмываем стандартные эритроциты (как это сделать
читайте ЗДЕСЬ). Добавляем с помощью пастеровской пипетки по 1 капле отмытых
эритроцитов (А-эритроциты в А-лунки и
так далее). Пластинки перемешиваем осторожным постукиванием. Ставим
пластинки в термостат. При температуре 37 градусов инкубируем в течение 45
минут.
Спустя 45 минут под лампой смотрим на реакцию
преципитации. Указываем титр.