Сегодня мы познакомимся с аппаратом Helena и научимся измерять на нём такие показатели коагулограммы, как АЧТВ, ПТВ, ПТИ, фибриноген и НМО.
Включаем аппарат с помощью клавиши ON. Он должен прогреться.
Контроль качества
Если контроль качества не проходит, калибруем до тех пор, пока не пройдёт.
Какие есть реактивы? Лучше всего использовать "родные" реактивы Helena.
Подготовить 2 дозатора и чистые кюветы. Все кюветы перед использованием просматриваем на прозрачность. В среднем одного набора кювет хватает на 2 недели, если у вас очень чистоплотная санитарка.
Ставим два контейнера для отходов класса Б. Один для замачивания кювет, второй - для наконечников.
Разводим контрольку дистиллированной водой согласно инструкции. У нас это 1 мл воды. Переворачиваем раз 8 для полного растворения, без образования пены. Подождать, пока хорошо растворится.
Тромбопластин Л для измерения протромбинового времени. APTT и Calcium Clor для измерения АЧТВ.
Берём реактив Tromboplastin L. Небходимое небольшое количество наливаем в большую колбу, который ставим в отверстие для инкубации. Сразу всё содержимое не наливаем и не инкубируем, так как при длительном стоянии в тепле реактив начинаем работать хуже. Доливаем каждый раз в большую колбу на инкубации при необходимости.
Согласно инструкции смотрим значения нормы и патологии.
Например, патология (А): ПТВ - 25,1; ПТИ - 46,3; МНО - 2,0; АЧТВ - 51,4; фибриноген - 2,94. Норма (N): ПТВ - 13,5; ПТИ - 107,0; МНО - 0,94; АЧТВ - 28,9; фибриноген - 2,77.
На АЧТВ нет смысла делать контрольку. Выбираем Протромбиновое время.
Затем нажимаем клавишу 1 (Analyses). Выйдет надпись АРТТ - нажимем 2 раза Enter, а затем клавишу вниз (перевёрнутый треугольник). Появится название РТ.
Соотношение контролька/реактив равно 1:2 (40 мкл контрольки и 80 мкл тромбоплатина л).
Берём дозатор на 40 мкл. Кюветы для контрольки ставим в левый нижний угол для инкубации. Инкубация занимает 2 минуты. В левую кювету наливаем норму (40 мкл), в правую - патологию (40 мкл). Нажимаем кнопку Timer 1.
В большую колбу наливаем нужное количество Tromboplastin L (для протромбинового времени). Когда пройдёт инкубация 2 минуты, перемещаем кюветы в измерительные ячейки.
Перемешиваем тромбопластин Л дозатором (как при титровании). Нажимаем Optic 1 и из большой колбы в инкубаторе наливаем 80 мкл тромбопластина в нормальную контрольку.
Нажимаем Optic 2, перемешиваем дозатором в инкубаторе тромбопластин Л, заливаем 80 мкл.
Ждём выдачи результата анализатором Хелена. Результат выдаётся быстро, поэтому успевайте всё быстренько записывать. U - это фибриноген. если что.
Не забывайте, что реактивы нужно ПСТОЯННО перемешивать! Перед каждым использованием. Чтоб они не осаждались. Иначе у вас контроль не пройдёт.
Разница с контролем может быть плюс/минус 10 процентов. Иногда допускается 15%.
Как калибруем?
Если что-то пошло не так (анализатор завышает или занижает контрольные показатели), то их нужно откалибровать. Если не хотите вручную пересчитывать погрешность измерения.
Для этого нажимаем на анализаторе клавишу 2 - Setup Test - Enter. Выбираем Method - Clothing + Fib. Уменьшайте или увеличивайте оптическую плотность, чтобы повысить или понизить значения контроля для нужного показателя.
Перед каждым использованием реактива, перед каждым залитием, реактив очень хорошо перемешиваем с помощью дозатора (как при титровании).
Если вы не можете откалибровать показатели на анализаторе (не поняли, как это делается не можете найти подходящие длины волн или ещё что-то), то можете пересчитывать погрешность. Например, контрольа пртотромбинового времени занижена на 30%, тогда данные, полученные на анализаторе у пациентов вы также уменьшаете на 30%.
Это очень муторно и долго, поэтому всё же лучше. легче и проще откалибровать Хелену.
Методика измерения коагулограммы на анализаторе Helena
Кровь для гемостаза берут в пробирки с голубой крышкой (с цитратом натрия).
Начинаем сортировать с варфаринщиков (если есть), так как в начале реактив работает лучше, когда его только открыли.
Затем сортируем кровь из женских консультаций, так как там назначают АЧТВ (полный анализ). Затем - все остальные. Нумеруем, отмечаем подчёркиванием, когда заканчиваются анализы, в которых требуется АЧТВ.
Если имеется недобор крови - бракуем, гемолиз и хиллёз - бракуем (лёгкий гемолиз можно взять в работу), сгусток - сразу бракуем.
Разлиновываем листочек по количеству анализов, на который будем заносить результаты. Отдельно записываем результаты контроля (К1 - норма, К2 - патология):
Пробирки расставляем по 10 штук в ряд. Снимаем крышки с пробирок. Первым делом измерим АЧТВ.
Методика измерения АЧТВ
Берём по 5 кювет (на 10 анализов), дозатор на 25 мкл. Меню - обычный треугольник - АРТТ (Timer 1).
Наливаем в кюветы первых две плазмы (1 и 2 номер) по 25 мкл, меняя наконечник. Добавляем 25 мкл реактива АРТТ. Нажимаем Timer 1.Греем кальций хлористый прямо во флаконе на инкубаторе анализатора.
Через каждую минуту ставим новые кюветы в инкубатор анализатора (3 и 4 кровь, 5 и 6 ... и так далее), закапываем 25 мкл сыворотки пациентов и 25 мкл APTT.
Переставляем кюветы из инкубатора в измерительные лунки. Перед измерением кювет нажимаем Optic 1 и Optic 2. Через 3 минуты добавляем 25 мкл перемешанного хлористого кальция.
Записываем данные АЧТВ в разлинованный листок.
Методика измерения ПТВ, ПТИ, фибриногена и МНО на анализаторе Helena
Подготавливаем 5 кювет (на 10 пациентов), 2 дозатора на 40 мкл для сыворотки и 8 мкл для реактива Tromboplastin L (либо в другом объёме в соотношении 1:2).
Меню - перевёрнутый треугольник - РТ.
Timer 1 - после первой кюветы
Timer 2 - после 2 кюветы
Инкубация 2 минуты.
Закапываем 40 мкл сыворотки в кювету в инкубаторе. Нажимаем Timer 1. Через 2 минуты переставляем кювету в измерительные лунки, закапываем 80 мкл перемешанного тромбопластина Л. Нажимаем Optic 1 и Optic 2. Каждая лунка даёт нам 4 показателя: ПТВ, ПТИ, фибриноген и МНО. Успеваем их быстро записать!
NB! Если реактив плохо идёт его не греем. На старых бланках гемостаза может быть написано тромбиновое время. Вместо него пишем ПТИ.
Когда переписываем результаты с листочка на бланка, то чтобы не запутаться делаем так. Записал результат - вычеркнул его!
